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| 三氯消毒剂杀菌效果试验观察 |
| 发布日期:2010-02-02 来源:(第一军医大学南方医院 感染办 广东 广 作者:张亚莉，耿穗娜，陈进华，李岚，汪能平 |
摘要：
以0.2％康威达消毒片(主要成份为三氯异氰脲酸)的水溶液，对两种实验菌(金黄色葡萄球菌、大肠杆菌)悬液分别作用5、10、15min．杀菌率达100％。对乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性血清作用30min，HBsAg抗原破坏率达96.88％表明此消毒剂杀菌效果好、作用持久。
有机含氯消毒剂三氯异氰脲酸，目前逐渐进入临床应用阶段。我们对康威达消毒片(主要成分为三氯异氰脲酸)进行杀菌实验与HBsAg抗原性破坏实验观察以验证康威达消毒片的杀菌效果。
1 材料和方法
1．1 标本
1．1．1 细菌悬液实验菌为金黄色葡萄球菌(ATCC-25923)、大肠杆菌(ATCC25922)。取其普通营养琼酯24h新鲜培养物，分别用无菌磷酸盐缓冲液稀释成含菌量为5x106-5x107/ml的悬液。
1.1．2 乙型肝炎表面抗原(HBsAg)混合血清将数份乙型肝炎病毒感染者的血清混合。
1.2 试剂
1.2.1 消毒剂取康威达消毒片(由浙江西子卫生消毒剂厂生产，有效氯500mg/片)溶于250ml蒸馏水中
1.2.2 中和剂O.5g硫代硫酸钠，3g tween-8O，溶于100ml 0.03mol/L磷酸盐缓冲液中(pH 7.2～7.4)，高压灭菌，121℃，15min。
1.3 方法
1.3.1 中和剂选择试验实验分组为：① 消毒剂+金黄色葡萄球菌液；②(消毒剂+金黄色葡萄球菌液)+中和剂；⑧ 中和剂一r金黄色葡萄球菌液；④ (消毒剂+中和剂)+金黄色葡萄球菌液；⑤ 磷酸盐缓冲液(PBS)+菌悬液(正常菌对照)；⑥ PBS对照；⑦ 中和剂对照；⑧ 培养基对照。如果实验结果为第⑥、⑦、⑧组无细菌生长，第③、④、⑤组间菌数之差不超过10％，第①组不长菌或菌数少于第②组，第②组≥100cfu/ml，表明所用中和剂及其浓度适宜。实验在室温下进行，结果取3次实验平均值。
1.3.2 悬液定量杀菌试验：取已制备的金黄色葡萄球菌悬液和大肠杆菌悬液各0．5m1分别与4．5ml 0．2％康威达消毒剂(对照组用PBS)混匀，分别作用5、1O、
15min后，取0．5ml菌药混合液加入盛有4．5 ml中和剂的试管中混匀，中和作用10 min，活菌计数，并计算杀菌率，杀菌率=(消毒前菌数-消毒后菌数)/消毒前菌数x100％.
1.3.3 HBsAg抗原性破坏实验：采用ELISA法，用已备好的HBsAg混合血清与生理盐水稀释，取稀释血清0．5m1与等量0．2％康威达消毒剂混合(对照组用等量的生理盐水)作用5、1O、2O、30rain，并与中和剂中和10min，倍比稀释至16384倍(pH7．2)测HBsAg滴度，同时设阴、阳性对照，以各组D450与阴性对照D450的比值<2.1表示HBsAg抗原性完全破坏。计算HBsAg抗原破坏率，HBsAg抗原破坏率=(消毒前平均滴度的倒数-消毒后平均滴度的倒数)/消毒前平均滴度的倒数×100％。
2 结果
2.1 中和试验结果
用含0.5％硫代硫酸钠、3％tween-80的PBS溶液中和实验浓度消毒液，符合所定要求(表1)。
表1 康威达消毒剂中和试验结果
组别 平均菌数(efu／m1)
清毒剂+金黄色葡萄球菌液
(消毒剂 金黄色葡萄球菌液)+中和剂
中和剂+金黄色葡萄球菌液
(消毒剂+中和剂)+盘黄色葡萄球菌液
磷酸盐缓冲液(PBS)+菌悬液(正常菌对照)
PBS对照
中和剂对照
培养基对照 220
10800
5090000
4930000
5100000
0
0
0
2.2 杀菌效果
试验表明，以0．2％康威达消毒剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌分别作用5、10min杀灭率均为99.89％；作用15 in杀灭率可达100％(表2)。
2.3 HBsAg抗原性破坏实验结果O．2％康威达消毒剂对HBsAg分别作用5、10、20、
30mill，HBsAg抗原性破坏率分别为87.50％、87.50％、90.50％、96.88％。
表2康威选消毒剂杀菌效果
细菌 阳性对照组平均菌数 作用不同时间的平均杀灭率（%）
5min 10min 15min
金黄色葡萄球菌液 6170000 99.89 100 100
大肠杆菌 5860000 99.89 99.99 100
3 讨论
有机含氯消毒剂三氯异氰脲酸，其分子中含有三个氯，比其他消毒剂性能稳定、作用持久。本实验0．2％的康威达消毒剂对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌作用15min杀菌率达100％；对HBsAg阳性血清作30min，HbsAg抗原破坏率为96．88％，表明此消毒剂杀菌效果稳定。
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